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凱氏定氮儀微量蛋白檢測實驗操作步驟

來自 實驗室儀器網

凱氏定氮儀微量蛋白檢測實驗操作步驟可以分成消化 蒸餾 滴定三大步驟。

凱氏定氮儀微量蛋白檢測實驗操作步驟

第一步:消化

將預先稱量好的固體硫酸鉀/硫酸銅催化劑粉末約6g(可適當加量)小心加入洗凈干燥的消化管底部;分別將樣品1、2和空白對照(約2mL)各兩份用分析天平差減法直接倒入消化管底部,記錄各組重量;用量筒小心稱取濃硫酸16mL加入各消化管底部。將消化管放在管架上,放入消化爐,啟動通風櫥。設置消化溫度時間曲線:170℃(根據樣品碳化和沸騰的情況,可適當提高或降低預消化溫度,并盡量避免樣品碳化沸騰掛壁以提高檢測準確度),30min——250℃,10min——370℃(為保證消化效果,可根據情況適當提高至400℃以上),120min。當消化管內出現穩定的恒沸白色酸霧并回流時,可蓋上消化管蓋以減少硫酸損失。當樣品被消化為明亮的藍綠色或綠色液體時,即可停止消化,待其冷卻至室溫后,取出蒸餾,關閉通風櫥。

第二步:蒸餾

向凱氏定氮儀的三個儲液桶中分別加入足量的35%NaOH、2%H3BO3和蒸餾水(根據處理樣品量,至少1L),旋緊儲液桶蓋子。開機,打開循環水,不放入樣品,預蒸餾2min。向樣品管中小心加入20mL蒸餾水以稀釋硫酸,待其變為明亮的藍色溶液時,小心放入蒸餾架,卡緊卡槽時注意將消化樣品管口卡緊以防止氨蒸氣流失;向500mL接收三角瓶中加入少量(約0.6mL)混合指示劑,并設定加硼酸12s,加堿8s,蒸餾8—9min,保存設置后啟動儀器。當氨蒸氣隨冷凝水流出時(注意氨蒸氣管出口浸沒于接收三角瓶的硼酸溶液中),接收瓶中的硼酸溶液會由玫紅色變為藍色,待蒸餾完畢,用蒸餾水將氨蒸氣管出口的殘液沖洗入接收瓶后取出待測。將樣品管取出,小心倒入水槽,并及時清洗。放入下一個樣品管和接收瓶,重復以上操作。蒸餾完畢后,關閉循環水。待蒸餾水冷卻后放出。如短時間內不再使用定氮儀,應用蒸餾水替換酸液和堿液,重復加酸加堿過程以清洗酸堿管路,維護設備。

第三步:滴定

用0.1NNaOH、0.1NHCl、蒸餾水分別潤洗酸式滴定管各三次,最后用0.01037N滴定用標準HCl潤洗兩三次。加入0.01037N滴定用標準HCl,并小心放液至0刻度。開始滴定,左手控制滴定速度,右手不斷搖動混勻三角瓶中溶液。(可預先對樣品消耗鹽酸量有一個大致的估計,即每毫升0.01N鹽酸可滴定約0.14mg氮)臨近滴定終點時溶液開始由藍色變為藍灰色,在最后一滴或半滴時微微呈現紫紅色。視線與滴定管水平時讀取并記錄鹽酸消耗量。用0.01037N滴定用標準HCl補滿至0刻度后,可滴定下一個樣品。

以標準硫酸銨檢測的蒸餾回收效果,實驗結果表明:當氮含量為1mg時,以1500W蒸餾器蒸餾8min,平均氮回收率為96.9%;以1500W蒸餾器蒸餾9min,平均氮回收率可達100%,蒸餾回收效果理想。建議對于低蛋白含量樣品測量而言,降低蒸餾器功率,并適當延長蒸餾時間可進一步改善回收率,從而使結果重復性更好。

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